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你知道細胞培養的具體步驟都有哪幾步嗎?

發布時間: 2022-12-07  點擊次數: 110次
  你知道細胞培養的具體步驟都有哪幾步嗎? 
  細胞培養技術指的是細胞在體外條件下的生長,在培養的過程中細胞不再形成組織(動物)。培養物是單個細胞或細胞群。細胞在培養時都要生活在人工環境中,由于環境的改變,細胞的移動或受一些其他因素的影響,培養時間加長,傳代導致細胞出現單一化型。
  一、細胞復蘇
  將凍存細2113胞從液氮5261中取出后,在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融4102化。移人15ml離心管中,加入10ml預熱1653的DMEM*培養基,輕輕吹勻,離心,2000rpmX2min,棄上清液。
  加入10mlDMEM培養基清洗,棄上清液。加入10mlDMEM*培養基,輕輕吹打,接種于10cm盤中,在含5%CO2的細胞培養箱中培養。
  二、細胞傳代
  細胞密度達到80%~90%時.去培養基,10mlPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人細胞培養箱3min。加人1mlDMEM*培養基終止胰酶消化,轉移至15ml離心管。
  加入10mlPBS清洗細胞培養盤,轉移至15ml離心管,2000rpmX2min,棄上清液。再加入10mlPBS(經高壓滅菌,保存于40C),吹勻,吸取10微升進行計數,按照1×106/盤接種,在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。
  三、細胞凍存
  細胞密度達到80%~90%時,去培養基,10mlPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人細胞培養箱3min。加入lmlDMEM*培養基終止胰酶消化,轉移至15ml離心管。加入10mlPBS清洗細胞培養盤,轉移至15ml離心管,2000rpmX2min,棄上清液。
  加入lml凍存液(90%血清,10%DMSO),放入凍存盒內(盒內有異丙醇,以保證溫度降低的速度),立即放入一80℃冰箱內,過夜,第二天放入液氮中,可以保存至少兩年,如不放人液氮,可以保存三個月。
  凍存液的配制:70%的*培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。
  科研實驗中,細胞的體外培養一直是一個重要環節。細胞要養好,就要用好血清,如Ausbian?特級胎牛血清,它適合各種細胞培養,尤其適合難養細胞,如:干細胞、肝細胞,神經細胞,原代培養、細胞融合、轉染細胞等。

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